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人抑制素B(INH-B)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書
點擊次數:477 發布日期:2019-5-10  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
人抑制素B(INH-B)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書 
AE90928Hu
 
使用前仔細閱讀本說明書。酶聯免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術原理,來檢測人抑制素B(INH-B),只能用于研究用途,不得用于醫學診斷。
  用于人血清、血漿及相關液體樣本中抑制素B(INH-B)測定。
工作原理:
本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定樣品中人抑制素B(INH-B)水平。向預先包被了人抑制素B(INH-B)單克隆抗體的酶標孔中加入人抑制素B(INH-B),溫育;溫育后,加入生物素標記的抗抑制素B(INH-B)抗體。再與鏈霉親和素-HRP結合,形成免疫復合物,再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶,然后加入底物A、B,產生藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中人抑制素B(INH-B)的濃度呈正相關。

試劑盒組成: 
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說明書 1份 1份  
封板膜 2片(48) 2片(96)  
密封袋 1個 1個  
酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標準品120ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
標準品稀釋液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
鏈霉親和素-HRP 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
生物素標記的抗抑制素B(INH-B)抗體 0.5ml×1瓶 1 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存
 
 
需要而未提供的試劑和器材:
  • 37℃恒溫箱。
  • 標準規格酶標儀。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水,
  • 一次性試管
  • 吸水紙
 
注意事項:
  • 從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
  • 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
  • 底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
 
洗板方法:
 手工洗板方法:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。
 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中

標本要求: 
1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

操作程序:
  • 標準品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。)
60ng/L 5號標準品 120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液
30 ng/L 4號標準品 120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液
15 ng/L 3號標準品 120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液
7.5 ng/L 2號標準品 120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液
3.75 ng/L 1號標準品 120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液
 
  • 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
  • 加樣:1)空白孔,空白對照孔不加樣品,生物素標記的抗抑制素B(INH-B)抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;2)標準品孔:加入標準品50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體,故不加);3)待測樣品孔:加入樣本40ul,然后各加入抗抑制素B(INH-B)抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育60分鐘。
  • 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  • 顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
  • 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后10分鐘以內進行。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。
 
操作程序總結:



試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。
2.批內與批間應分別小于9%和15%
 
檢測范圍:
檢測范圍:2 ng/L -60 ng/L
 
保存條件及有效期:
保存:2-8℃。
有效期:6個月(2-8℃)。
 
來源:上海聯碩生物科技有限公司
聯系電話:15221965586服務電話:400 0918 500
E-mail:lianshuo@vip.126.com

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